Résidus de nitroimidazoles dans le porc : méthode Wanyi LCMS-TQ9200 LC-MS/MS validée selon GB 31658.23-2022

Les nitroimidazoles sont des médicaments synthétiques antibactériens et antiprotozoaires qui inhibent efficacement les bactéries anaérobies et les trichomonas. Ils étaient autrefois largement utilisés dans l'élevage et l'aquaculture pour contrôler les infections digestives et les maladies protozoaires, améliorant ainsi les taux de survie. Pourtant, les médicaments parents et leurs métabolites sont manifestement toxiques : ils sont rapidement métabolisés chez les animaux en plusieurs métabolites actifs, dont certains persistent dans les tissus beaucoup plus longtemps que le composé parent.

Les études toxicologiques montrent que les nitroimidazoles parents et leurs principaux métabolites sont potentiellement cancérigènes, mutagènes et génotoxiques. Les résidus dans les aliments d'origine animale pénètrent dans le corps humain par la chaîne alimentaire, et une ingestion à long terme à faible dose peut interférer avec l'hématopoïèse, endommager les chromosomes et augmenter le risque de mutation génique. La Chine a donc interdit les nitroimidazoles chez les animaux producteurs d'aliments, et aucun résidu n'est autorisé dans les aliments d'origine animale, ce qui rend les tests de résidus précis essentiels pour la sécurité alimentaire.

GB 31658.23-2022, la norme nationale de sécurité alimentaire pour les résidus de nitroimidazoles dans les aliments d'origine animale par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem, est la base légale de ce travail. Elle couvre les médicaments parents et les métabolites dans les matrices bovines, ovines et autres. Un laboratoire d'analyse avait besoin d'un flux de travail validé pour la viande de porc couvrant quatre composés cibles - métronidazole, hydroxymétronidazole, dimétridazole et hydroxydimétridazole - y compris les métabolites hydroxy qui sont plus difficiles à retenir et à ioniser, à des niveaux sub-ppb, avec un faible report et une précision stable sur de longues séquences d'injection.

Peser 2 g d'échantillon (précision de 0,05 g) dans un tube à centrifuger de 50 mL, ajouter 10 µL de solution de travail d'étalon interne mixte de 1 µg/mL, agiter au vortex pendant 30 s et laisser reposer pendant 10 min. Ajouter 15 mL d'acétate d'éthyle, agiter au vortex pendant 2 min et centrifuger à 10 000 tr/min pendant 5 min. Transférer le surnageant et répéter l'extraction une fois avec 15 mL d'acétate d'éthyle supplémentaires. Combiner les deux extraits et évaporer à sec sous azote dans un bain-marie à 25 °C.

Dissoudre le résidu dans 5 mL d'acide chlorhydrique 0,1 mol/L, agiter au vortex pendant 1 min, ajouter 5 mL de n-hexane, secouer pendant 1 min et centrifuger à 5 000 tr/min pendant 5 min. Jeter la couche d'hexane et répéter l'étape de dégraissage une fois avec 5 mL d'hexane supplémentaires. Conditionner une cartouche d'extraction en phase solide avec 3 mL d'acide chlorhydrique 0,1 mol/L et 3 mL de méthanol, charger la couche aqueuse, laver avec 3 mL d'acide chlorhydrique 0,1 mol/L et éluer avec 4 mL de méthanol. Évaporer l'éluat à sec à 35 °C sous azote, reconstituer dans 0,5 mL d'eau, agiter au vortex pendant 1 min et filtrer avant injection.

L'étalonnage apparié à la matrice dans un extrait de porc vierge compense la suppression d'ions de la matrice de viande et maintient la fiabilité de la quantification au niveau des traces. Les formes des pics étaient bonnes, sans traînées, confirmant que l'extraction à l'acétate d'éthyle, le dégraissage à l'hexane et la purification par SPE éliminent les interférences à 1 µg/kg.

Le système LC-MS/MS Wanyi LCMS-TQ9200 a fourni une méthode validée pour quatre résidus de nitroimidazoles dans la viande de porc selon la norme GB 31658.23-2022. Les pics symétriques, un R2 supérieur à 0,9995, une précision inférieure à 10 %, un report négligeable et une récupération comprise entre 60 % et 120 % démontrent que le flux de travail répond aux exigences qualitatives et quantitatives de routine pour le dépistage et la confirmation des médicaments vétérinaires interdits, et fournit une base technique fiable pour la surveillance des risques liés à la sécurité alimentaire.

• L'acquisition MRM sur triple quadripôle offre la sélectivité nécessaire pour confirmer les résidus interdits à 0,5 µg/kg dans une matrice de viande grasse.
• La chimie C18 sub-2 µm sur une colonne de 2,1 mm à 0,3 mL/min résout quatre analytes en moins de 8 minutes, avec une faible consommation de solvant.
• Les étalons internes marqués isotopiquement corrigent les pertes de récupération lors de l'extraction et de la SPE, stabilisant les résultats entre les lots.
• Le dégraissage à l'hexane avant la SPE protège la cartouche et la colonne analytique, prolongeant la durée de vie dans les laboratoires de résidus à haut débit.