Détermination du 5'-monophosphate d'uridine dans les fortifiants nutritionnels alimentaires par chromatographie liquide à haute performance

En tant que nucléotide, le 5'-monophosphate d'uridine (UMP) est un intermédiaire essentiel du métabolisme des acides nucléiques chez les organismes vivants. C'est le nucléotide le plus abondant dans le lait de mammifères, et les besoins alimentaires en uridylate sont significativement plus élevés que pour les autres nucléotides pendant la croissance et le développement de la progéniture. Ces dernières années, la recherche a révélé que l'UMP participe non seulement au métabolisme énergétique et à la synthèse de l'ARN, mais améliore également la fonction de la barrière intestinale en modulant les voies de signalisation cellulaire. De plus, il agit en synergie avec les vitamines liposolubles pour favoriser l'absorption des nutriments et la fonction immunitaire. L'UMP est couramment ajouté comme fortifiant nutritionnel aux préparations pour nourrissons et aux aliments pour le bétail/la volaille, où sa pureté et sa concentration ont un impact direct sur la valeur nutritionnelle et la sécurité du produit final.

Mots-clés :Fortifiant nutritionnel alimentaire, UMP, Nucléotides, Chromatographie liquide haute performance.

1. Instruments et réactifs

1.1 Liste de configuration de la CLHP

Tableau 1 Liste de configuration de la CLHP

1.2 Réactifs et étalons

Tableau 2 Liste des réactifs et des étalons

1.3 Matériel expérimental et équipement auxiliaire

Nettoyeur à ultrasons

Mélangeur vortex

2. Méthode et conditions expérimentales

Colonne de chromatographie : Nova Element AQC18, 5μm 4,6x250mm.

3. Résultat de l'expérience

3.1 Test d'aptitude du système

Le test d'aptitude du système a démontré que le pic cible était bien formé, avec un nombre de plateaux théoriques élevé et aucun pic interférant à proximité, répondant ainsi à toutes les exigences expérimentales.

Fig 1 Chromatogramme de la solution de travail standard de 5'-monophosphate d'uridine

Tableau 3 Résultats des tests pour la solution de travail standard de 5'-monophosphate d'uridine

3.2 Test de répétabilité

La solution de travail standard de 5'-monophosphate d'uridine (UMP) a été injectée six fois. L'écart type relatif (RSD) du temps de rétention était de 0,085 %, et celui de la surface du pic était de 0,191 %. Les deux valeurs étaient inférieures à la limite spécifiée de 2,0 %, démontrant la conformité aux exigences expérimentales.

Fig 2 Chromatogrammes du test de répétabilité du 5'-monophosphate d'uridine (UMP)

Tableau 4 Résultats des tests de répétabilité pour le 5'-monophosphate d'uridine (UMP)

3.3 Test d'échantillon

La surface du pic de la solution de travail standard de 5'-monophosphate d'uridine (20 mg/L) était de 322,525, tandis que celle de la solution d'échantillon testée était de 274,211. Sur la base de la méthode de l'étalon externe, la teneur en UMP dans l'échantillon a été déterminée à 17 mg/L.

Fig 3 Chromatogramme de l'échantillon testé

Tableau 5 Résultats des tests d'échantillons

3.4 Test d'aptitude du système pour les substances apparentées

Le test de la solution d'aptitude du système pour les substances apparentées a démontré que tous les pics des composés étaient bien formés, avec des nombres de plateaux théoriques élevés et une résolution supérieure à 2,0, répondant ainsi aux exigences expérimentales.

Fig 4 Chromatogramme de la solution de travail standard de 5'-monophosphate d'uridine (UMP)

Tableau 6 Résultats des tests pour la solution de travail standard de 5'-monophosphate d'uridine (UMP)

3.5 Test de reproductibilité de l'échantillon

Après six injections consécutives de la solution d'aptitude du système, la répétabilité du temps de rétention pour le 5'-UMP, l'uracile et l'uridine était respectivement de 0,031 %, 0,058 % et 0,102 %, tandis que la répétabilité de la surface du pic était respectivement de 0,243 %, 0,134 % et 0,134 %, répondant aux exigences expérimentales.

Fig 5 Chromatogramme du test de reproductibilité de l'échantillon

Tableau 7 Résultats des tests de répétabilité du temps de rétention des substances apparentées

Tableau 8 Résultats des tests de répétabilité de la surface du pic des substances apparentées

3.6 Test de sensibilité pour les substances apparentées

Le rapport signal/bruit du pic principal de 5'-UMP dans la solution de test de sensibilité pour les substances apparentées est significativement supérieur à 3, répondant aux exigences expérimentales.

Fig 6 Chromatogramme de la solution de test de sensibilité des substances apparentées

Tableau 9 Résultats des tests de la solution de sensibilité des substances apparentées

3.7 Tests des solutions de référence et d'échantillon des substances apparentées

La surface du pic de la solution de référence (17 mg/L) était de 275,856. La surface totale des pics des impuretés dans la solution testée, à l'exclusion du 5'-monophosphate d'uridine, était de 38,021. Calcul par la méthode de l'étalon externe, la teneur en impuretés dans l'échantillon est de 2,343 mg/L.

Fig 7 Chromatogramme du test de la solution de référence des substances apparentées

Tableau 10 Résultats des tests de la solution de référence des substances apparentées

Fig 8 Chromatogramme du test de la solution d'échantillon des substances apparentées

Tableau 11 Résultats des tests pour la solution d'échantillon apparentée

4. Conclusion

Dans cette expérience, en référence à la « Norme nationale de sécurité alimentaire GB 1903.69-2024 : 5'-monophosphate d'uridine, exhausteur nutritionnel alimentaire », l'analyse a été effectuée à l'aide d'un système de chromatographie liquide haute performance Wayeal LC3200 équipé d'un détecteur ultraviolet. Les résultats expérimentaux montrent que le test d'aptitude du système a démontré de bonnes formes de pics pour tous les composés, des nombres de plateaux théoriques élevés et une résolution supérieure à 2,0, répondant aux exigences expérimentales. La répétabilité du temps de rétention pour la solution de travail standard de 5'-monophosphate d'uridine et les substances apparentées était inférieure à 0,2 %, et la répétabilité de la surface du pic était inférieure à 0,3 %, ce qui indique une bonne reproductibilité. La solution de test de sensibilité pour les substances apparentées a montré un rapport signal/bruit pour le pic principal de 5'-monophosphate d'uridine significativement supérieur à 3, répondant aux exigences expérimentales. Tous les résultats des tests d'échantillons étaient normaux. Les données ci-dessus répondent aux exigences instrumentales spécifiées dans la méthode standard.