Détermination des impuretés nitrosamines dans les comprimés de chlorhydrate de propranolol par chromatographie liquide

Mots-clés : Propranolol, chromatographie liquide à haute performance, impuretés nitrosamines

1. Instruments et réactifs​

1.1 Liste de configuration du système CLHP

1.2 Réactifs et solutions standards

Tableau 2 Réactifs et solutions standards

1.3 Matériels expérimentaux et équipements auxiliaires

Nettoyeur à ultrasons

Mélangeur vortex

2. Méthode expérimentale

2.1 Préparation de la solution

2.1.1 Solution d'hydroxyde de sodium à 2 mol/L : Prélever 4 g d'hydroxyde de sodium, dissoudre dans 50 mL d'eau et bien mélanger.

2.1.2 Mélange acétonitrile-eau-acide sulfurique (55:45:0,1) : Prélever 1,6 g de dodécylsulfate de sodium et 0,31 g de dihydrogénophosphate de tétrabutylammonium, ajouter 1 mL d'acide sulfurique, 450 mL d'eau et 550 mL d'acétonitrile. Ajuster à pH 3,3 avec une solution d'hydroxyde de sodium à 2 mol/L et bien mélanger.

2.1.3 Solvant : Identique à la phase mobile.

2.1.4 Solution linéaire : Peser avec précision une quantité appropriée d'étalon de référence de N-Nitroso-propranolol, dissoudre et diluer avec la phase mobile pour obtenir une solution contenant environ 200 ng par 1 mL comme solution mère standard. Ensuite, transférer avec précision des volumes appropriés de la solution mère dans six fioles jaugées de 100 mL, diluer jusqu'au trait avec la phase mobile et bien mélanger pour préparer une série standard de courbes de travail avec des concentrations de 0,8 ng/mL, 1 ng/mL, 2 ng/mL, 3 ng/mL, 4 ng/mL et 6 ng/mL.

2.1.5 Solution standard de référence : Peser avec précision une quantité appropriée d'étalon de référence de N-Nitroso-propranolol, dissoudre et diluer avec la phase mobile pour préparer une solution contenant environ 2 ng de N-Nitroso-propranolol par 1 mL comme solution standard de référence.

2.2 Préparation de l'échantillon

2.2.1 Solution d'échantillon : Peser avec précision une quantité appropriée de comprimés de chlorhydrate de propranolol finement pulvérisés, dissoudre et diluer avec la phase mobile pour préparer une solution contenant environ 0,27 mg de propranolol par 1 mL comme solution d'échantillon.

2.2.2 Solution de précision : Peser avec précision environ 297 mg de comprimés de chlorhydrate de propranolol finement pulvérisés dans une fiole jaugée de 100 mL. Ajouter une quantité appropriée de solution standard de référence de N-Nitroso-propranolol, dissoudre et diluer jusqu'au trait avec la phase mobile pour préparer un échantillon enrichi à 100 %. Bien mélanger pour obtenir la solution de précision.

3. Résultat de l'expérience

3.1 Spécificité

Fig. 2 Chromatogramme de spécificité

Remarque : Le solvant n'interfère pas avec la détection du N-Nitroso-propranolol, et les pics chromatographiques des autres impuretés dans la solution d'essai n'interfèrent pas non plus avec la détermination de l'impureté N-Nitroso-propranolol.

3.2 Test linéaire

Fig. 3 Courbe standard de l'impureté N-Nitroso-propranolol

Remarque : Les résultats expérimentaux montrent que le coefficient de corrélation (R) de la courbe d'essai de l'impureté N-Nitroso-propranolol dépasse 0,999, ce qui répond aux exigences du test.

3.3 Test de répétabilité

Fig. 4 Chromatogrammes de six injections en double pour l'étalon à 2 ng/mL

Tableau 3 Données de six injections en double pour l'étalon à 2 ng/mL

Remarque : Comme le montre le tableau ci-dessus, la répétabilité du temps de rétention du N-nitroso-propranolol est de 0,043 %, et la répétabilité de la surface du pic est de 0,464 %, ce qui indique une bonne répétabilité.

3.4 Test de précision

Fig. 5 Chromatogrammes de précision superposés du N-Nitroso-propranolol dans les comprimés

Tableau 4 Précision des comprimés de chlorhydrate de propranolol (N-Nitroso-propranolol)

Remarque : La récupération du N-Nitroso-propranolol dans six échantillons variait de 96,98 % à 104,71 %, avec une récupération moyenne de 101,38 %. La méthode montre une bonne précision et répétabilité.

3.5 Test de la limite de détection (LOD)

Fig. 6 Chromatogramme de test du N-Nitroso-propranolol à une concentration standard de 2 ng/mL

Tableau 5 Données de test de référence du N-Nitroso-propranolol à une concentration standard de 2 ng/mL

Remarque : Sur la base des données de test de l'étalon de référence de N-nitroso-propranolol à une concentration de 2 ng/mL dans le tableau ci-dessus, la limite de détection théorique du N-nitroso-propranolol est calculée comme étant de 0,151 ng/mL en utilisant un rapport signal/bruit de 3:1 comme critère de limite de détection.

3.6 Test des comprimés d'une marque

Fig. 7 Chromatogramme de test des comprimés d'une marque

Remarque : Le N-Nitroso-propranolol n'a pas été détecté dans les comprimés de la marque.

4. Conclusion

Une étude sur l'impureté nitrosamine N-nitroso-propranolol dans les comprimés de chlorhydrate de propranolol a été menée conformément au document d'orientation récemment publié par la FDA sur l'établissement de niveaux d'apport acceptables pour les impuretés liées aux substances médicamenteuses nitrosamines (NDSRI). Selon ce document, la valeur AI (apport acceptable) est calculée comme étant de 1500 ng/jour. Compte tenu de la dose quotidienne maximale de ce produit (200 mg), la limite de contrôle dans les comprimés ne doit pas dépasser 7,5 ppm. La validation de la méthode a été effectuée à l'aide de la série de chromatographie liquide à haute performance (CLHP) de Wayeal équipée d'un détecteur UV. Des échantillons de comprimés ont été analysés à l'aide de la méthode de détection validée, et aucune impureté nitrosamine N-nitroso-propranolol n'a été détectée. Toutes les données ci-dessus sont conformes aux exigences de la pharmacopée en matière d'instrumentation.