Détermination de l'analogue hydroxy de la méthionine dans les aliments pour animaux par chromatographie liquide à haute performance Wayeal

L'analogue hydroxy de la méthionine (MHA) est un additif à base d'acide organique largement utilisé dans l'industrie des aliments pour animaux comme substitut de la méthionine.porcs (porcelets et porcs de finition), les ruminants (bœufs laitiers et bovins à viande) et l'aquaculture (poissons et crevettes).amélioration de l'environnement intestinal des animaux, et améliorer l' immunité des animaux.

La chromatographie liquide haute performance couplée à la détection UV est bien adaptée à l'analyse de divers échantillons complexes d'aliments pour animaux, en raison de son excellente efficacité de séparation,résistance aux interférences de matrice forte, une sensibilité de détection élevée et des résultats quantitatifs stables et fiables.Cette expérience a été réalisée conformément à la norme "Détermination de l'analogue hydroxy de la méthionine dans les aliments pour animaux par chromatographie liquide à haute performance" (GB/T 19371-2025).. A Wayeal LC3400 series high performance liquid chromatograph equipped with a UV detector was employed to validate the sample pretreatment procedure and the liquid chromatographic separation and detection system, permettant à la fois la détection qualitative et l'analyse quantitative précise de l'analogue hydroxy de la méthionine dans différents types d'échantillons d'aliments.

Mots clés: aliments pour animaux; analogue hydroxy de la méthionine; chromatographie liquide haute performance.

1Instruments et réactifs

1.1 Liste de configuration HPLC

Tableau 1 Liste des configurations du système de chromatographie liquide haute performance

1.2 Liste des réactifs et des normes de référence

Tableau 2 Liste des réactifs et des normes de référence

1.3 Conditions de chromatographie liquide

Tableau 3 Conditions de chromatographie liquide à haute performance

1.4 Matériaux expérimentaux et équipements auxiliaires

un nettoyant à ultrasons;

un mélangeur de vortex;

Centrifugeuses à grande vitesse;

la balance analytique;

Je suis un shaker.

2. Méthode expérimentale

2.1 Préparation de la solution

2.1.1 Solution de courbe standard:

On pèse avec précision une quantité appropriée de méthhionine hydroxy analogue standard de référence et on la dissout dans de l'acétonitrile à 10% pour préparer une série de solutions standard à des concentrations massiques de 0.5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0- Je vous en prie.0- Je vous en prie.0, et 80.0μ5 ml de chaque solution standard sont transférés séparément dans des tubes d'essai bouchés de 15 ml. 0,1 ml de solution d'hydroxyde de potassium à 50% sont ajoutés avec précision et tourbillonnés pendant 15 secondes.Ensuite, ajoutez avec précision 0.2 ml de solution à 50% d'acide phosphorique, et tourbillon pendant 15 secondes supplémentaires. Centrifugez à 8000 r/min pendant 5 minutes. Passez le supernatant à travers un filtre à membrane microporeuse avant analyse.

2.1.2 Solution d'échantillon d'essai:

On pèse 5 g d'échantillon d'alimentation dans un récipient, on ajoute 50 ml de solution d'acétonitrile à 10% et on mélange pendant 30 minutes. On place sur un shaker et on secoue pendant 30 minutes. On centrifuge à 8000 r/min pendant 5 minutes.et conserver le supernatant pour une utilisation ultérieure. Transférer avec précision 5 ml du surnaturant ci-dessus dans un tube à essai bouché de 15 ml. Ajouter avec précision 0,1 ml de solution d'hydroxyde de potassium à 50% et le vortex pendant 15 s. Puis ajouter avec précision 0.2 ml de solution à 50% d'acide phosphorique et tourbillon pendant 15 secondes. Centrifugez à 8000 r/min pendant 5 minutes. Passez le supernatant à travers un filtre à membrane microporeuse avant l'analyse. Préparez deux solutions parallèles d'échantillons d'essai.

2.1.3 Solution d'essai de récupération:

Transférer avec précision 2,5 ml de l'échantillon supernatant et 2,5 ml de chaque solution de série standard dans un tube d'essai bouché de 15 ml. Ajouter avec précision 0.1 ml de solution à 50% d'hydroxyde de potassium et tourbillon pendant 15 s. Puis ajouter avec précision 0,2 ml de solution d'acide phosphorique à 50% et tourbillon pendant 15 secondes. Centrifugez à 8000 r/min pendant 5 minutes.Passer le supernatant à travers un filtre à membrane microporeuse avant analyse.

3Résultat de l' expérience.

3.1 Linearité et portée

Tableau 4 Tableau de concentration de la courbe standard

Figure 1 courbe standard de l'analogue hydroxy de la méthionine

Note: Des quantités appropriées de la solution standard de référence de l'analogue hydroxy de méthionine ont été prélevées et diluées en série à une série de concentrations pour préparer la courbe standard.La plage linéaire était de 0.5Je ne sais pas.80.0μLe coefficient de corrélation (R) était de 0.99983, indiquant une excellente linéarité de l'analyte.

3.2 Précision

Figure 2 Chromatogrammes superposés d'essai de précision pour la norme de référence (20,0 μg/mL)

Tableau 5 Données d'essai de précision pour la norme de référence (20,0 μg/mL)

Note: La norme de référence de l'analogue hydroxy de méthionine (à une concentration de 20.0μLa répétabilité (RSD) du temps de rétention était de 0,084%, et celle de la zone de pic était de 0,391%, ce qui indique une bonne précision de l'instrument.

3.3 Récupération

Figure 3 Chromatogrammes superposés de l'essai de récupération de l'analogue hydroxy de la méthionine dans les aliments pour animaux

Tableau 6 Données d'essai de récupération de l'analogue hydroxy de la méthionine dans les aliments pour animaux

Note: L'échantillon a été mélangé à la norme de référence à une concentration de 40.0μLa récupération obtenue est de 88,56%, ce qui indique une bonne précision de la méthode.

3.4 Limite de détection (LOD)

Fig. 4 Chromatogramme de l'analogue standard de l'hydroxy-méthionine (2.5μg/mL)

Tableau 7 Données d'essai pour la norme de référence de l'analogue hydroxy de la méthionine (2.5μg/mL)

Remarque: sur la base des données d'essai de la norme de référence de l'analogue hydroxy de méthionine à 2,5 μg/ml, comme indiqué dans le tableau ci-dessus, la limite théorique de détection (LOD) a été calculée à 0.033 μg/mL à un rapport signal/bruit de 3 (S/N = 3).

3.5 Épreuve d'un échantillon d'alimentation

Figure 5 Chromatogramme d'un échantillon d'alimentation

Note: L'analogue hydroxy de la méthionine a été détecté dans un échantillon d'aliments à une concentration de 0.402μg/mL.

4Conclusion

Cette expérience a été réalisée conformément à la norme "Détermination de l'analogue hydroxy de la méthionine dans les aliments pour animaux par chromatographie liquide haute performance" (GB/T 19371-2025),à l'aide du chromatographe liquide Wayeal série LC3400 à haute performance équipé d'un détecteur UVLes résultats expérimentaux ont montré que le pic cible présentait une bonne symétrie et un nombre de plaques théorique élevé.5Je ne sais pas.80.0μLe coefficient de corrélation (R) était supérieur à 0.9998Les valeurs RSD pour le temps de rétention et la zone de pointe de la norme de référence MHA (20.0μLa récupération de MHA dans les échantillons d'aliments a atteint un pic de 40.0μLa limite théorique de détection (LOD) de l'AMH a été déterminée à 0.033μMHA a été détecté avec succès dans un échantillon d'aliments à une concentration de 0.402μToutes les données ci-dessus satisfont aux exigences de la méthode de la pharmacopée pour les performances de l'instrument.