Détermination des résidus de β-agonistes dans le porc à l'aide du système Wayeal LCMS-TQ9200 de chromatographie liquide-spectrométrie de masse en tandem

Cette expérience fait référence à "GB 31658.22-2022 National Food Safety Standard — Determination of β-Agonist Residues in Animal-Derived Foods by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry" and utilizes the Wayeal LCMS-TQ9200 liquid chromatography-tandem mass spectrometry system to determine the content of β-agonists in porkLes résultats expérimentaux indiquent que l'essai d'adéquation du système a démontré des sommets bien formés et une bonne linéarité, répondant aux exigences expérimentales.La répétabilité du temps de rétention pour la solution de travail standard β-agoniste était inférieure à 1%.Pour la solution d'essai de sensibilité des β-agonistes, les rapports signal/bruit des pics principaux à des concentrations de 0.2 ng/ ml et 0,5 ng/ ml étaient significativement supérieurs à 3 et 10 respectivement, répondant aux exigences expérimentales.

Aucun β-agoniste n'a été détecté dans l'essai de l'échantillon de viande de porc..

Les mots clés:Chromatographie liquide-spectrométrie de masse en tandem; β-agonistes; Clenbutérol; Sécurité alimentaire.

1Instruments et réactifs

1.1 Liste de configuration du LCMS

Tableau 1 Liste des configurations des instruments

1.2 Réactifs et normes

Tableau 2 Liste des réactifs et normes

1.3 Matériel expérimental et équipement auxiliaire

Nettoyeur à ultrasons

Mélangeur de vortex

Bains d'eau à température constante

Centrifugeuse à grande vitesse

2. Méthode expérimentale

2.1 Pré-traitement des échantillons

2.1.1 Hydrolyse et extraction enzymatiques

Pesez 2 g de l'échantillon (avec une précision de ± 0,05 g) dans un tube centrifugeur de 50 ml. Ajoutez 6 ml de solution tampon d'acétate d'ammonium de 0,2 mol/l et 40 μl de β-glucuronidase/arylsulfatase.et incubé à 37°C dans le noir, en agitant dans un bain d'eau pendant 16 heuresLaisser refroidir à température ambiante pour une utilisation ultérieure.

2.1.2 Extraction, purification et concentration

Prenez la solution préparée, ajoutez 100 μl de la solution de travail interne standard de 100 ng/ml, tourbillonnez pour mélanger à fond et centrifugez à 8000 r/min pendant 8 minutes.1 mol/l de solution d'acide chlorhydriqueAprès centrifugation à 8000 r/min pendant 8 minutes, ajuster le pH du surnaturant à 10 ± 0.5 à l'aide d'une solution d'hydroxyde de sodium de 10 mol/l. Ajouter 15 ml d'acétate d'éthyle, agiter à vitesse moyenne pendant 5 minutes, centrifuger à 5000 r/min pendant 5 minutes. Ramasser la couche organique supérieure.ajouter 10 ml d'éther tert-butylméthyle, agiter à vitesse moyenne pendant 5 minutes, centrifuger à 5000 r/min pendant 5 minutes, ramasser la couche organique supérieure, combiner toutes les couches organiques et évaporer jusqu'à séchage sous un flux d'azote à 50°C.Dissoudre le résidu dans 5 ml de solution à 2% d'acide formique et mettre de côtéPréparer une colonne d'extraction en phase solide à échange de cations en mode mixte en l'activant séquentiellement avec 3 ml de méthanol et 3 ml d'acide formique à 2%.rincer séquentiellement avec 3 ml d'acide formique à 2% et 3 ml de méthanolÉluer la colonne avec 3 ml de 5% de solution de méthanol ammoniacée. Evaporer l'éluat jusqu'à ce qu'il soit sec sous un flux d'azote à 50 °C. Ré-dissoudre le résidu dans 0,5 ml de méthanol.Solution à 1% d'acide formique (10:90, v/v), mélanger soigneusement et filtrer à travers une membrane microporeuse de 0,22 μm pour analyse par chromatographie liquide-spectrométrie de masse en tandem.

2.2 Conditions d'expérimentation

2.2.1 Conditions de chromatographie liquide

Colonne de chromatographie C18, 1,8 μm 2.1*100 mm

Phase mobile: A: acide formique à 0,1% dans l'eau; B: méthanol

Débit: 0,3 ml/min

Température de la colonne: 40°C

Volume d'injection: 3 μl

3Test d'adéquation du système

L'essai d'adéquation du système montre que les pics cibles sont bien formés sans interférence d'autres pics d'impuretés, répondant aux exigences expérimentales.

Figure 1 Chromatogramme de sept β-agonistes testés (1 ng/mL)

3.2 Portée linéaire

En prenant des solutions standard de β-agonistes et en utilisant des solutions de travail à concentration intermédiaire, une courbe standard a été préparée par étapes.avec R2 > 0.99, indiquant une bonne relation linéaire.

Tableau 3 Tableau des plages linéaires pour les β-agonistes

Figure 2 Chromatogramme de courbe standard de sept β-agonistes

3.3 Limite de détection (LOD) et limite de quantité (LOQ)

Dans cette méthode, la limite de détection (LOD) et la limite de quantification (LOQ) des β-agonistes sont fixées à 0,2 ng/mL et 0,5 ng/mL, respectivement.le rapport signal-bruit aux concentrations spécifiées pour LOD et LOQ est supérieur à 3 et à 10, respectivement, répondant aux exigences de sensibilité expérimentale.

Tableau 4 Rapports signal/bruit correspondants pour la LOD et la LOQ de chaque composé

Figure 3 Chromatogrammes ioniques de sept β-agonistes à concentration LOD et LOQ

3.4 Essai de précision

Une solution mixte de substances standard β-agonistes à faibles, moyennes et hautes concentrations a été prise et injectée six fois consécutives pour comparer le temps de rétention et les écarts de la zone de pic.Les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessousTous les β-agonistes présentaient des écarts de temps de rétention inférieurs à 1% et des écarts de zone de pic inférieurs à 3%, répondant aux exigences expérimentales.

Tableau 5 Essai de précision pour chaque composé

Fig. 4 Chromatogrammes de test de précision de sept β-agonistes (6 injections)

3.5 Essai par échantillonnage

Les échantillons de viande de porc achetés sur le marché ont été testés selon la méthode de prétraitement mentionnée et aucun β-agoniste n'a été détecté.Aucun pic chromatographique n'a été observé aux temps de rétention correspondant aux sept β-agonistes., tandis que les autres pics représentent les signaux de matrice après hydrolyse enzymatique.

Figure 5 Chromatogramme d'essai de l'échantillon de porc

4Conclusion

Cette méthode utilise le système Wayeal LCMS-TQ9200 de chromatographie liquide-spectrométrie en tandem pour la détermination des β-agonistes dans le porc.Les données démontrent que tous les sommets chromatographiques présentent une bonne forme sans queue, la sensibilité répond aux exigences expérimentales, les coefficients de corrélation linéaires dépassent 0.99, et la précision est satisfaisante avec des écarts de temps de rétention inférieurs à 1% et des écarts de zone de pic inférieurs à 3% pour six injections consécutives de chaque composé.Aucun β-agoniste n'a été détecté dans les tests sur les échantillons de viande de porc.Ces résultats indiquent que la méthode, équipée du système Wayeal LC-MS/MS, remplit les exigences de détection qualitative et quantitative de routine pour les analystes cibles.